qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit(1000*50ul)
qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit(1000*50ul)
使用SYBR Green I進行兩步法RT-PCR,用于基因表達分析
qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit(1000*50ul)
使用SYBR Green I進行兩步法RT-PCR,用于基因表達分析
QuantiTect SYBR Green PCR Kit使用SYBR Green I通過兩步法real-time RT-PCR對cDNA目標序列進行高特異性的定量檢測。熱啟動和*的實時定量PCR緩沖液確保了對cDNA目標序列高特異性和靈敏度的real-time定量檢測。dNTP混合液含有dUTP,可選擇性進行UNG處理。為便于使用,預混液可儲存在2–8°C。
特異性定量檢測。
在Rotor-Gene 3000上使用針對人BAX的QuantiTect Primer Assay和的試劑盒分析稀釋的人白細胞cDNA。熔解曲線分析中出現單峰,NTC反應呈平直曲線,說明使用QuantiTect Kit和Assay可實現高特異性定量。NTC:無模板對照。Norm. Fluoro.:標準化的熒光。
Performance
QuantiTect SYBR Green PCR Kit在寬泛的范圍內符合線性規律,可實現特異性定量檢測(參見"Specific quantification over a wide linear range")。與其他聚合酶相比,HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴格的熱啟動,進一步提高了PCR反應的特異性。*的PCR緩沖液和HotStarTaq DNA Polymerase,確保低豐度轉錄本的定量檢測,低至5個拷貝的目標序列也可被準確檢測(參見"Highly specific amplification")。QuantiTect SYBR Green PCR Kit與QuantiTect Reverse Transcription Kit和QuantiTect Primer Assays配合使用,可獲得靈敏、可靠的結果(參見"Specific and sensitive quantification")。
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit中經特別優化的UNG溶液配合經驗證的PCR預混液可有效避免PCR產物中的殘留污染,并對靶序列進行可靠的定量檢測(參見"High specificity in real-time PCR")。
Principle
QuantiTect SYBR Green PCR Kit含有優化的即用型預混液,可使用SYBR Green I對cDNA靶序列進行高特異性和靈敏度的real-time定量分析。預混液中的熒光染料SYBR Green I可對很多不同的靶序列進行分析,無需合成靶標特異性標記引物。*的PCR緩沖液含有K+和NH4+,能促使特異性引物退火,獲得高PCR特異性和靈敏度(參見"Specific primer annealing")。此外,HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴格的熱啟動,可防止非特異性產物的形成。
QuantiTect SYBR Green PCR預混液含有dUTP,可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 (UNG)預處理,保證之前反應殘留的PCR產物會影響后續的PCR反應。
組份 | 特點 | 優勢 |
---|---|---|
HotStarTaq DNA Polymerase | 95ºC孵育15分鐘即可活化 | 室溫下即可構建qPCR反應體系 |
QuantiTect SYBR Green PCR Buffer | NH4+和K+的平衡組合 | 特異性引物退火確保PCR結果可靠 |
dNTP mix | 含有dUTP,會部分替代dTTP,可進行UNG處理 | 可選擇進行UNG處理,以消除之前反應殘留的PCR產物 |
SYBR Green I dye | DNA雙鏈結合時,生成強烈的熒光信號 | 高度靈敏的定量檢測 |
ROX dye | 在Applied Biosystems或Agilent的PCR儀上進行熒光信號校準 | 可在需要ROX染料的PCR儀上進行準確的定量檢測。不會干擾其他real-time PCR儀 |
Procedure
QuantiTect SYBR Green PCR Kit無需進行繁瑣耗時的反應條件優化。只需簡單地將引物、探針和cDNA模板加入到即用型PCR預混液中,即可開始反應(參見"Two-step RT-PCR")。使用操作手冊中的實驗方案可在任何real-time PCR儀上得到快速、可靠的結果。如果需要,反應液可用尿嘧啶DNA糖基化酶(UNG)預處理,以去除之前反應殘留的PCR產物。
為在兩步法real-time RT-PCR中獲得理想結果,我們推薦使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。此試劑盒可在20分鐘內快速合成cDNA,并可去除基因組DNA污染。
QuantiTect SYBR Green PCR Kit配合QuantiTect Primer Assays可在基因表達分析中獲得高度特異性的結果。基因組范圍、生物信息學驗證的引物對覆蓋所有人類、小鼠、大鼠和其他各類生物基因。QuantiTect Primer Assays可在GeneGlobe上方便地訂購。