QIAGEN試劑盒miRNeasy Micro Kit (50) 分子生物試劑
QIAGEN試劑盒miRNeasy Micro Kit (50)
從小樣本中有效純化miRNA和總RNA
高純度RNA,適用于多種下游應用
簡單、靈敏的操作流程
自動化實驗方案
miRNeasy Micro Kit用于從少量培養細胞、分選細胞、冰凍切片激光捕獲顯微切割(LCM)樣本和動物及人體組織中純化RNA,包括miRNA和其他小RNA分子。
從較少量的細胞中可靠回收miRNA。
使用miRNeasy Micro Kit從10倍梯度稀釋的Jurkat細胞(106至10個細胞)中純化總RNA。[A] 采用手動方法或 [B] 使用QIAcube全自動核酸純化儀,從各洗脫液中純化RNA,重復兩次。在Rotor-Gene Q實時熒光定量PCR分析儀上,使用miScript PCR System及純化的RNA檢測miR-16。在低至10個細胞中亦可檢測出miR-16,并獲得一致且可重復的CT值。陰性對照中未檢測到信號(藍色和黃色曲線)。
QIAGEN試劑盒miRNeasy Micro Kit (50)
miRNeasy實驗流程。
miRNeasy Micro Kit可從少量培養細胞(至多1 x 106個細胞)和多種動物及人體組織(至多5 mg組織)中純化總RNA,包括miRNA和其他小RNA分子。試劑盒整合了基于ben fen/胍的樣本裂解方法和基于硅膠膜的總RNA純化方法。
試劑盒中包括的QIAzol Lysis Reagent是ben fen和異硫氰酸胍的單相溶液,便于裂解組織,抑制RNases,并去除大部分有機抽提裂解液中的胞內DNA和蛋白。樣本在QIAzol Lysis Reagent中勻漿后,加入氯仿并離心,RNA位于上層水相。抽提水相,在RNeasy MinElute離心柱上純化RNA,污染物被洗去。du特設計的RNeasy MinElute離心柱可用少至10 µl洗脫體積濃縮RNA。
miRNeasy Micro Kit純化的總RNA包括18個核苷酸以上的RNA。富含miRNA的組分和總RNA(>200 nt)組分可分開純化。包括miRNA的總RNA非常適合通過real-time RT-PCR的miRNA定量分析。單獨富含小RNA的組分更適用于某些mRNA和rRNA會導致更高背景的應用。
在QIAcube全自動核酸純化儀上可wan全自動純化包括miRNA的總RNA。新型QIAcube全自動核酸純化儀采用技術處理QIAGEN離心柱,將自動化、低通量樣品制備無縫整合到實驗室工作流程中。使用QIAcube全自動核酸純化儀的樣品制備流程與手工操作相同(如裂解、結合、洗滌和洗脫),可使用miRNeasy Micro Kit進一步純化高品質RNA。
miRNeasy Micro Kit可純化包括miRNA的總RNA,用于多種應用,包括:
Northern印跡分析
定量real-time RT-PCR(如使用miScript PCR System)
芯片分析