Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒 分子生物試劑
Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒
du te的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因組DNA去除方案和內(nèi)質(zhì)控的一種快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染,同時內(nèi)質(zhì)控RNA可以監(jiān)測逆轉(zhuǎn)錄和擴增反應(yīng)是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的一切。合成的cDNA適用于進行real-time PCR, 可以對任何mRNA區(qū)域的靶向序列進行可靠定量。
Performance
du te的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。去除基因組DNA污染對于獲得精確基因表達結(jié)果非常關(guān)鍵,并且在不能設(shè)計出RNA特異性的引物時,例如當(dāng)分析單外顯子基因時,也需要去除基因組DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以節(jié)省時間和成本,因為不需要在反應(yīng)中或反應(yīng)后單獨進行DNase消化。
全新開發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本(RNA分子),可直接加入您的樣本并同時被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,可直接反應(yīng)儀器或相應(yīng)試劑是否正常,實驗構(gòu)建的體系是否存在錯誤,以及反應(yīng)體系中是否存在抑制劑。預(yù)期的Cq (CT)范圍可以用來確認逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的成功與否,以及實驗結(jié)果的可重復(fù)性。
Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒
QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA親和性確保您可從任何RNA模板獲得高產(chǎn)率cDNA。即便是難擴增模板,如高GC含量或含有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板,也可被成功進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。Reverse Transcription Mix包含一種特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機引物混合物,可以從包括5’區(qū)域在內(nèi)的RNA轉(zhuǎn)錄本的任何位置進行cDNA合成。無論擴增靶標(biāo)位于轉(zhuǎn)錄本的哪個位置,該試劑盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高產(chǎn)量cDNA。同時對于低表達豐度的基因, 該試劑盒還可提供更高靈敏度的檢測能力。
QuantiNova Reverse Transcription Kit可在較寬的起始量范圍內(nèi)提供精確的結(jié)果,在標(biāo)準(zhǔn)的實驗方案中起始RNA量可zui高達5 µg,在特殊要求的實驗條件下該用量可以加倍。
Principle
QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA親和性,可以在極寬的模板量范圍內(nèi)(10 pg– 5 μg)合成cDNA(見圖:5 µg–10 pg起始 RNA的精確定量)。無論擴增靶標(biāo)位于轉(zhuǎn)錄本的哪個位置,該試劑盒可提供用于real-time PCR分析的高產(chǎn)量cDNA。即使難擴增模板,比如高GC含量或含有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板,也可被成功進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。QuantiNova RT Buffer經(jīng)過優(yōu)化,可兼容real-time PCR緩沖液。
為獲得精確的real-time RT-PCR基因表達檢測結(jié)果,非常重要的一點是保證只有cDNA被擴增和檢測到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因組DNA干擾(見圖:有效去除gDNA污染保證準(zhǔn)確定量轉(zhuǎn)錄本)。使用gDNA Removal Mix節(jié)省了時間和成本,因為不需要在反應(yīng)中或反應(yīng)后單獨進行DNase消化。同時,也無需設(shè)計RNA特異性引物或探針。
檢測cDNA合成的差異度可以顯示實驗結(jié)果的可重復(fù)性。全新開發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本(RNA分子),可直接加入您的樣本并同時被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,可直接反應(yīng)儀器或相應(yīng)試劑是否正常,實驗構(gòu)建的體系是否存在錯誤,以及反應(yīng)體系中是否存在抑制劑。因為內(nèi)質(zhì)控和真實轉(zhuǎn)錄本的性質(zhì)相似,所以它可以在接下來的qPCR實驗中用來確認逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的成功與否(見圖:內(nèi)質(zhì)控可靠檢測是否存在抑制劑)。
成分 | 優(yōu)勢 |
---|---|
gDNA Removal Mix | 確保在real-time RT-PCR中只檢測RNA |
Internal Control RNA | 確認RT-PCR成功與否 |
QuantiNova Reverse Transcriptase | RNA模板量范圍極寬(10 pg – 5 μg RNA) 高靈敏度 |
QuantiNova RT buffer system | 逆轉(zhuǎn)錄難擴增模板 |
RT Primer Mix | 從轉(zhuǎn)錄本任意區(qū)域合成cDNA,包括從5’區(qū) |
Procedure
使用QuantiNova Reverse Transcription Kit進行基因組DNA去除和cDNA合成僅需20分鐘。該試劑盒包含進行快速cDNA合成的所需的一切成分。
純化后的RNA和gDNA Removal Mix簡單孵育即可除去基因組DNA污染。和其它方法不同的是,RNA樣本接下來可直接與Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的預(yù)混液混合,進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。使用QuantiNova Reverse Transcriptase,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可以在低溫下進行,包括對于復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)模板。反應(yīng)在42°C的溫度條件下進行保證了RNA的完整性,并隨后在85°C進行酶滅活以終止反應(yīng)。不需要進行額外的RNA變性或RNase H降解。
Applications
QuantiNova Reverse Transcription Kit可從任何起始材料(包括激光微切割樣本或組織活檢樣本)獲得高效及高靈敏度real-time RT-PCR結(jié)果。
相關(guān)產(chǎn)品 | |||
商品編號 | 商品品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
208352 | 超敏探針RT-PCR試劑盒 | 100T | Qiagen |
208356 | 超敏探針RT-PCR試劑盒 | 2500T | Qiagen |
208354 | 超敏探針RT-PCR試劑盒 | 500T | Qiagen |