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凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) 分子生物試劑

  • 更新時間：  2023-07-27
  • 產品型號：  12362
  • 簡單描述
  • 凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
    純化得到至多10 mg的無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA


    純化得到的DNA內毒素水平低于0.1 EU/µg


    純化流程快，同時去除內毒素



    獲得高產量、高拷貝質粒DNA



    使用LyseBlue，獲得的裂解和高產量的DNA
詳細介紹

凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

純化得到至多500 μg無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA

  • 純化得到的DNA內毒素低于0.1 EU/µg

  • 純化流程快，同時去除內毒素

  • 獲得高產量的高拷貝質粒DNA

  • 使用LyseBlue，獲得的裂解和高產量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術，可快速制備不含內毒素的質粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液，DNA產量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉染級純的應用。

質粒純化方法與轉染效率。

使用兩種方法獨立制備pRSVcat，分別使用脂質體介導的方法轉染到COS-7、HeLa和LMH細胞中，及使用磷酸鈣轉染至Huh7細胞中。平均轉染效率以相對于QIAGEN Plasmid Kit制備的DNA的轉染效率表示。

凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

性能

EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內毒素去除步驟整合到質粒純化過程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Maxi Cartridge過濾細菌裂解液，通過重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質粒DNA。100–250 ml培養菌液至多可純化500 µg DNA。（培養量取決于質粒拷貝數量、插入片段大小、宿主菌和培養介質。）純化的DNA無內毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除細菌在裂解過程中釋放的內毒素，內毒素會影響原代細胞和敏感培養細胞的DNA轉染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內毒素DNA高度適用于可重復且結果可靠的轉染。QIAGEN超純無內毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。

質粒制備中的內毒素水平*
質粒準備方法內毒素(EU?/µg DNA)平均轉染效率?
EndoFree Plasmid Kit0.1154%
QIAGEN Plasmid Kit9.3100
2x CsCl2.699%
Silica-gel slurry1230.024%
* 宿主菌：大腸桿菌DH5α  質粒：pRSVcat.
? 1 ng LPS = 1.8 EU.
? 根據表中數據計算 "Plasmid purification method versus transfection efficiency".
無內毒素DNA配合原代細胞得到高轉染率*
DNA純化方法轉染細胞百分比
EndoFree Plasmid Kit21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁細胞轉染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進行轉染。該數據是細胞表達GFP的百分率，由轉染48小時后綠色熒光細胞數量確定。轉染效率是每種純化方法制備的超過2個不同的DNA中6–9個復制樣本的平均值。（數據由C. Chew and J. Parente友情提供， Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理

純化的質粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質粒DNA。





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